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龙脑樟组织培养新技术探究

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【摘要】本文研究了龙脑樟的组织培养新技术,选用龙脑樟嫩枝作为外植体,以MS为培养基筛选出适合龙脑樟各阶段的适宜植物激素浓度和配比,分别为:外植体培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L;增殖培养基MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L;生根培养基MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。通过研究含有龙脑樟树外植体在不同浓度和不同种类激素配比培养基的生长情况,本文基本选出最适合龙脑樟树组织培养的培养基。

【关键词】龙脑樟树(CirmamonunCamphora);组培;植物激素;培养

基龙脑樟树(CirmamonunCamphora)既是名贵稀有的药材,又是重要的化工原料,有植物黄金的美誉。它原产于印尼苏门答腊岛,天然龙脑香树曾经是龙脑的主要来源,但是由于长期过渡采伐已近枯竭。龙脑樟是国内专家一直以来都在寻找的植物资源。龙脑樟树目前主要靠实生苗造林,单株个体得油率和含龙脑香精量差异大。如何在天然龙脑樟树中选择具有较高内含物优良单株,并将其扩大繁育,获得大量性状优良无性系苗木,组织培养无疑是最具有应用潜力的快速繁殖技术。通过植物组织培养技术,不仅可在短期内提供整齐一致的良种苗木,又能为树种改良和利用及遗传转化打下基础,已在许多植物育苗生产中得到应用。

1材料与方法

1.1研究地概况研究区位于广东省广州市银排岭113°22′18.99″E,23°11′52.89″N海拔39m,亚热带季风气候,年平均气温22℃,年平均降雨量为1623.6-1899.8mm,地貌属低山丘陵,土壤属红壤。研究区属银排岭林区,立地条件较好,龙脑樟种类优良。

1.2试验材料试验材料选取从广西取回种植在银排岭内苗圃的龙脑樟树,筛选优良植株后剪取健壮的新生嫩枝。

1.3试验方法

1.3.1外植体诱导培养以MS为基本培养基,添加6-ba0.5,1.0,2.0mg/L,NAA0.2mg/L或IBA0.2mg/L,设置6种处理,每种处理接外植体为30个,重复3次。培养30d后观察记录,计算诱导率(诱导率=萌芽数/外植体数100%)。

1.3.2增殖培养根据试验外植体诱导培养结果,在初步确定适合龙脑樟增殖培养的激素种类以及激素浓度的基础上,以MS为基本培养基,添加6-BA0.5,1.0,1.5mg/L,NAA0.05,0.1mg/L,GA30.5mg/L,设置6种处理,每个处理接种3瓶,每瓶7个芽,重复3次。培养基接种芽后放培养室,连续进行3个培养周期以上的增殖培养,继代培养30d为一个周期,培养周期末观察记录,计算增殖倍数(增殖倍数=增殖芽数/接种芽数)。

1.3.3生根培养以MS为基本培养基,添加IBA0.5,1.0,1.5mg/L,NAA0.05,0.1mg/L共6种处理,每个处理3瓶,每瓶7个芽苗,重复3次。将超过2cm的芽苗接种于培养基中,培养30d后观察记录,计算生根率。(生根率=生根数/芽苗数×100%)

1.3.4培养基及培养条件所有培养基的蔗糖用量为30g/L,卡拉胶用量为6.5g/L,灭菌前培养基pH值调整为5.8。培养室温度设定为26℃,光照强度约为1500LuX,光照时间为10h/d。

1.4数据处理方法采用Microsoftexcel2003对数据进行处理。

2结果与分析

2.1外植体诱导培养龙脑樟外植体诱导培养养30d后观察结果见表1和表2。从表1可以看出,添加NAA的培养基诱导率最高为40.04%,最低为36.21%,而添加IBA的培养基诱导率最高为37.50%,最低为31.25%,可见培养基添加NAA的诱导率明显高于添加IBA的诱导率,因此确定NAA对龙脑樟的z嫩芽诱导有明显促进作用,其中6-BA浓度为0.5mgL、NA浓度0.2mg/L的培养基诱导率最高(40.04%),初步确定适合龙脑樟外植体的芽诱导培养基。观察发现所有萌芽叶片正常,叶色正常,生长正常。

2.2增殖培养继代培养30d后观察结果见表3和表4。结果表明,NAA与6-BA配合使用对增殖培养有极显著影响,不同浓度6-BA之间对增殖培养也有极显著影响。从表3和表4可以看出,6-BA在不定芽增殖培养中起主要作用,NAA浓度为0.5mg/L对分化有较好的促进作用。培养基中6-BA浓度为1.5mg/L、NAA浓度为0.5mg/L时,增殖倍数最大,增殖倍数达4.1倍,芽苗生长正常,优于其他5种处理,初步确此法适合龙脑樟不定芽的继代增殖培养。

2.3生根培养芽苗诱导生根结果见表5和表6。结果表明,IBA在龙脑樟不定根诱导中作用明显,在一定范围内随着IBA浓度的增大,生根率也在增加;NAA对诱导不定根有较大的作用,且对根系的生长有明显影响,当NAA0.1mg/L时根系生长表现较好;培养基IBA浓度为0.5mg/L、NAA浓度为0.1mg/L时生根率最高(81.12%),根数也多,根系生长正常,初步确定此法适合钟龙脑樟苗不定根的诱导培养。

3结论与讨论

本研究初步确定适合龙脑樟外植体芽诱导的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L,诱导率为40.04%;适合其继代增殖培养的培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L,增殖倍数为4.10;适合其不定根诱导的培养基为MS+IBA0.5mg/L+NAAO.1mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L+活性碳0.5g/L,生根率为81.12%。目前,本研究的龙脑樟组培技术,还不是很完善,在后续试验中,仍需继续努力研究培养基配方。

参考文献

[1]戴小英,章挺等.龙脑樟组培繁殖及植株再生技术研究[J].林业科技通讯,2016(8):6-9.

[2]冯瑜.龙脑樟组织培养再生体系研究[D].福州:福建农林大学,2015.15-21.

[3]徐剑.龙脑樟细胞悬浮培养体系的建立及优化[D].福州:福建农林大学,2015.11-20.

[4]蔡玲,吴幼媚等.樟脑型樟树组培单芽生根及移栽技术[J].林业科技开发,2014(4):96-98.

[5]蔡玲,覃子海等.樟脑型樟树芽器官离体培养技术[J].广西林业科学,2013(4):315-318.

作者:唐湛;吴刚;米秀宝;苏燕兰 单位:广东生态工程职业学院

脑与神经疾病杂志责任编辑:张雨    阅读:人次

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